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细胞分选仪进行细胞分选时缓冲液的选择

点击次数:232 发布时间:2020-12-11
   细胞分选仪通过磁珠分选的原理进行正选或者负选细胞,分选的细胞可立即用于流式细胞分析、功能性研究或下游分析,在短至25分钟之内,可一次同时分选多个样品;也可以同一个样品中连续分选出不同类型的细胞,大限度地减少了样品处理工作。
  细胞分选仪比仅用于分析对样本制备要求更高。需要在较短的时间内完成以确保分到高纯度的活细胞同时要具备功能性如增殖、分泌细胞因子等。要求高品质的单细胞悬液以确保良好的双联体鉴别,并在分选过程中因发生冲突而丢弃的尽量少。
  细胞分选仪对缓冲液的选择分析:
  处理哺乳动物细胞的常用培养基/缓冲液都是在1个大气压下使用的(实验室工作台上或CO2培养箱内),但在大多数细胞分选仪的分选仓内,压力通常会超过2-4个大气压(具体取决于选择喷嘴尺寸和分选条件)。
  样品分选缓冲液或分选收集缓冲液:DPBS或HBSS(去除Ca2+和Mg2+),均含10-25mM HEPES和蛋白质(通常为1-2%的热灭活血清或BSA),以及近的推荐使用BD FACS™Pre-Sort Buffer外加0.2-2%的蛋白质(浓度取决于应用)。不推荐RPMI或DMEM之类的碳酸氢盐介质缓冲液。原因是:
  1.与仪器上常使用的鞘液成分不同(碳酸氢盐与磷酸盐);
  2.设计上需要5%的CO2的环境来维持生理pH;
  3.通常包含二价阳离子(Ca2+和Mg2+)和苯酚(高荧光背景)。若必须使用碳酸氢盐介质,则应不含酚无Ca2+或Mg2+,或在25 mM的HEPES和蛋白质基础上添加~1 mM EDTA来减少二价阳离子副作用(使细胞“发粘”)。据报道,HEPES缓冲的碳酸氢盐培养基对光敏感109,通常流式样本均需避光放置。
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